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檢測試劑盒

  • 產品中心: 醫療器械
  • 產品名稱: 抗釀酒酵母IgA/IgG抗體(ASCA)檢測試劑盒
  • 規格型號: 48人份/盒

【預期用途】

本試劑盒用于體外定性測定人血清中抗釀酒酵母IgA/IgG抗體(ASCA),臨床上主要用于克羅恩病的輔助診斷。

【檢驗原理】

      本試劑盒采用酶聯免疫法(ELISA)測定標本中抗釀酒酵母抗體(ASCA)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相載體,往包被抗原的微孔中分別加入樣本,孵育后洗滌,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的酶標抗體,室溫孵育,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ASCA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中抗釀酒酵母IgA/IgG抗體(ASCA)的存在與否。

【主要組成成份

試劑盒組成

96孔配置

保存

說明書

1


封板膜

2


酶標包被板

12×8條)×1

2-8保存

陰性對照

500ul×1

2-8保存

陽性對照

500ul×1

2-8保存

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應對樣品進行稀釋,血清按200倍稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測要求。

1.     編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照2孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)。

2.     加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照100μl。然后在待測樣品孔中加入用樣品稀釋液稀釋后的待測樣品100μl。加樣時,將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.     溫育:用封板膜封板后室溫溫育30分鐘。  

4.     配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至400ml后備用。

5.     洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,倒扣吸水紙上,輕拍幾次吸干液體。每孔加洗滌液200μl,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,倒扣吸水紙上,輕拍幾次吸干溶液。

6.     加酶:每孔加酶標試劑100μl,空白孔除外。

7.     溫育:操作同3。

8.     洗滌:操作同5。

9.     顯色:每孔加入TMB溶液100μl,輕輕震蕩混勻,室溫避光顯色15分鐘。

10.   終止:每孔加終止液100μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與TMB液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

11.   測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。

 

【陽性判斷值】

1.      試驗有效性:a.試劑空白標準:空白對照孔平均值<0.1;b.陽性對照標準:(陽性對照孔平均值-空白對照孔平均值) 1.00; c. 陰性對照標準:(陰性對照孔平均值-空白對照孔平均值)≤0.3。

2.      陽性判斷值(CUTOFF值)的計算:陽性判斷值=(陰性對照孔平均值-空白對照孔平均值)+0.33。

OD值位于陽性判斷值附近的樣本,建議再進行重復實驗,或者與其他臨床診斷結果相結合,綜合進行結果判斷。




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